Vad är syftet med att använda ddNTP?
Vad är syftet med att använda ddNTP?

Video: Vad är syftet med att använda ddNTP?

Video: Vad är syftet med att använda ddNTP?
Video: 7.1 Sanger Sequencing using Dideoxyribonucleic Acid Nucleotides (ddNTPs) 2024, November
Anonim

DdNTP refererar till Dideoxinukleotider trifosfater som används i Sanger dideoxy-metoden för att producera olika längder av DNA-strängar för DNA-sekvensering. Detta resulterar i att DNA-polymerisationsprocessen (eller DNA-förlängning) avbryts eftersom denna process behöver en 3'-OH-grupp för att fortsätta.

Därav, varför används ddNTPs i sekvensering?

Dideoxinukleotider är kedjeförlängande hämmare av DNA-polymeras, Begagnade i Sangermetoden för DNA sekvensering . Dideoxiribonukleotiderna har ingen 3'-hydroxylgrupp, varför ingen ytterligare kedjeförlängning kan ske när denna dideoxinukleotid väl finns på kedjan. Detta kan leda till att DNA:t upphör sekvens.

På liknande sätt, ansluter ddNTP:er till dNTP:er? En eller flera av dNTP:er är radioaktivt märkta för att hjälpa till att visualisera replikeringsprodukterna. Slutligen får varje rör en av fyra speciella nukleotider som kallas dideoxinukleotider ( ddNTPs ). När det väl har inkorporerats kan dock DNA-polymeras inte förlänga kedjan ytterligare eftersom det behöver en 3'-OH för att bifoga till nästa nukleotid.

På samma sätt kan man fråga sig, hur stoppar ddNTPs en sekvenseringsreaktion?

När det finns i små mängder i sekvenseringsreaktioner , dideoxiribonukleosidtrifosfater ( ddNTPs ) avsluta sekvenseringsreaktion på olika positioner i de växande DNA-strängarna. ddNTP stoppar en sekvenseringsreaktion eftersom de: orsakar att DNA-polymeras faller av mallsträngen. c.

Vilken teknik som involverar dideoxinukleotider kan användas?

Sanger-sekvensering är en metod av DNA-sekvensering baserad på selektiv inkorporering av kedjeterminerande dideoxinukleotider genom DNA-polymeras under in vitro DNA-replikation. Utvecklad av Frederick Sanger och kollegor 1977, var den mest utbredd Begagnade sekvensering metod i cirka 40 år.

Rekommenderad: