Innehållsförteckning:

Hur väljer du kloner?
Hur väljer du kloner?

Video: Hur väljer du kloner?

Video: Hur väljer du kloner?
Video: Selecting Clones 2024, November
Anonim

När välja a klona , se till att rötterna är starka, vita och ivrigt sticker ut från odlingsmediet. Om rötterna är bruna och skrumpna, eller på annat sätt verkar inaktiva, sätt tillbaka dem och leta efter en bättre.

Dessutom, hur klonar man en enda cell?

  1. Räkna cellerna för att placera ~16 000 celler i den första brunnen (A1) på en 96-brunnars platta innehållande 200 µL medium.
  2. Ta bort 100 µL från A1-innehållande celler och blanda med B1, pipettera upp och ner 3x för att blanda väl innan du tar bort 100 µL och blandar med C1, etc.

Dessutom, hur väljer man en däggdjurscellkoloni? Placera plattan under mikroskopet för att välja odifferentierade friska kolonier . Välj kolonier med en P-20-pipett inställd på 10 ul. Noggrant plocka a koloni utan att bryta upp koloni till singel celler och överför den till en 96-brunnars platta med trypsin. Pipettera upp och ner ett par gånger för att skingra koloni.

På motsvarande sätt, hur använder man en kloncylinder?

Använder sig av steril medium pincett, plocka upp en kloningscylinder . Tryck försiktigt på den platta botten av cylinder i det släta silikonfettet och ta bort det med en plötslig vertikal rörelse. Om det görs på rätt sätt kommer detta att ge en jämn fördelning av fett på botten av produkten cylinder . Ställ in cylinder över en koloni.

Hur väljer man kolonier för stabila cellinjer?

Protokollet för att generera stabila cellinjer kräver flera steg som visas nedan:

  1. Generera en dödskurva för att bestämma den optimala antibiotikumkoncentrationen.
  2. Transfektera celler med önskad(a) plasmidkonstruktion(er)
  3. Välj och expandera stabila polyklonala kolonier.
  4. Identifiera enstaka kloner genom begränsad utspädning och expansion.

Rekommenderad: