Varför skulle ett restriktionsenzym inte skära?
Varför skulle ett restriktionsenzym inte skära?

Video: Varför skulle ett restriktionsenzym inte skära?

Video: Varför skulle ett restriktionsenzym inte skära?
Video: Why is My Restriction Enzyme Not Cutting DNA? 2024, Maj
Anonim

Det kan finnas flera olika anledningar till att du restriktionsenzym skär inte DNA som granskats i den här videon. Beredning av DNA som ska klyvas skall vara fri från föroreningar som fenol, kloroform, alkohol, EDTA, rengöringsmedel eller överskott av salter, som alla kan störa restriktionsenzym aktivitet.

I detta avseende, varför skär inte restriktionsenzymer bakteriellt DNA?

Bakterie ha restriktionsenzymer , även kallad restriktionsendonukleaser , som skära dubbelsträngad DNA på specifika punkter in i fragment. Intressant, restriktionsenzymer klyv inte sina egna DNA . Bakterie förhindra sina egna DNA från hugga ner av restriktionsenzym genom metylering av restriktion webbplatser.

Man kan också fråga sig, var skärs restriktionsenzymer? Restriktionsenzym Typer Generellt typ I enzymer skärs DNA på ställen på avstånd från igenkänningssekvensen; Typ II skära DNA inom eller nära igenkänningssekvensen; Typ III skära DNA nära igenkänningssekvenser; och typ IV klyver metylerat DNA.

På samma sätt frågas det, vad händer om man tillsätter för mycket restriktionsenzym?

Ofullständig matsmältning kan förekomma när för mycket eller för liten enzym är använd. De förekomst av föroreningar i de DNA-prov burk hämma enzymerna , vilket också resulterar i ofullständig matsmältning. Vissa restriktionsenzymer kräver kofaktorer för full aktivitet.

Varför fungerar inte mitt begränsningssammandrag?

Ofullständig eller inte matsmältning på grund av enzymaktivitet blockerad av DNA-metylering. Om ditt enzym är aktivt och smälter kontrollera DNA och de reaktionen ställs in med optimala förhållanden, men du ser fortfarande frågor med matsmältning , det kan bero på att de enzym hämmas av metylering av de mall-DNA.

Rekommenderad: