Vad händer om du tillsätter för mycket restriktionsenzym?
Vad händer om du tillsätter för mycket restriktionsenzym?

Video: Vad händer om du tillsätter för mycket restriktionsenzym?

Video: Vad händer om du tillsätter för mycket restriktionsenzym?
Video: HINTER или HINTEN?! — Разбираемся, в чём дело | Deutsch mit Yehor 2024, December
Anonim

Ofullständig matsmältning kan förekomma när för mycket eller för liten enzym är använd. De förekomst av föroreningar i de DNA-prov burk hämma enzymerna , vilket också resulterar i ofullständig matsmältning. Vissa restriktionsenzymer kräver kofaktorer för full aktivitet.

Dessutom, varför tillsätts restriktionsenzymer sist?

De restriktionsenzym är vanligtvis sista komponent Lagt till till en reaktion för att säkerställa att den inte utsätts för extrema förhållanden. Den sammansatta reaktionen ska blandas efter enzym tillägg. Blanda alla lösningar som innehåller restriktionsenzymer försiktigt att undvika enzym inaktivering.

Dessutom, hur kan restriktionsenzymsmältningen förbättras? Använd inte mer än rekommenderat enzym mängd (t.ex. 10 enheter av enzym per mikrogram DNA). Minska mängden enzym i reaktionen, om nödvändigt. Undvik långvarig inkubation av matsmältning reaktion. Använd den rekommenderade reaktionsbufferten.

Vet också, varför skulle ett restriktionsenzym inte skära?

Beredning av DNA som ska klyvas skall vara fri från föroreningar som fenol, kloroform, alkohol, EDTA, rengöringsmedel eller överskott av salter, som alla kan störa restriktionsenzym aktivitet. Om det finns en hämmare (ofta salt, EDTA eller fenol) kommer kontroll-DNA:t att göra det inte skära efter blandning.

Varför kan mängden enzym orsaka stjärnaktivitet?

Stjärnaktivitet är uppmjukning eller ändring av begränsningens specificitet enzym medierad klyvning av DNA som burk inträffa under reaktionsförhållanden som skiljer sig väsentligt från de optimala för enzym . Stjärnaktivitet kan hända på grund av närvaron av Mg2+, som är ses i HindIII, till exempel.

Rekommenderad: